Generierung neuraler Vorläuferzellen aus embryonalen Stammzellen in serumfreien Monolayer-Kulturen

Beginnen Sie mit einer Kultur von embryonalen Stammzellen der Maus.

Waschen Sie die Zellen mit einem Puffer, um Medien und Zellreste zu entfernen.

Es wird ein Enzymcocktail hinzugefügt, um Zellen von der Kolbenoberfläche zu lösen.

Fügen Sie Medien hinzu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen, und sammeln Sie die Zellen in einem Röhrchen. Zentrifugieren Sie und verwerfen Sie den Überstand, der die Enzyme enthält.

Resuspendieren Sie die Zellen in serumfreien neuronalen Kulturmedien.

Aussaat der Zellen in gelatinebeschichtete Multi-Well-Platten-Wells.

ausbrüten. Die embryonalen Stammzellen haften an der mit Gelatine überzogenen Oberfläche. Medienbestandteile wie Nährstoffe, Wachstumsfaktoren und Hormone erleichtern die Zellproliferation und bilden eine Monoschicht.

Bei dieser Zelldichte produzieren und setzen die embryonalen Stammzellen optimale Mengen an Wachstumsfaktoren und Zytokinen frei.

Diese Moleküle lösen intrazelluläre Signalwege aus und erleichtern so die Differenzierung embryonaler Stammzellen in neurale Vorläuferzellen.

Mischen Sie die Gelatine mit 500 Millilitern warmem PBS und bedecken Sie den Boden des Zellkulturbehälters mit gerade so viel Lösung, dass die Oberfläch