Differenzierung menschlicher neuronaler Stammzellen in 3D-Kultur mit Hilfe eines porösen Gerüsts

Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die einen porösen Einsatz enthält, der ein Polystyrolgerüst mit einer dreidimensionalen porösen Struktur hält.

Fügen Sie Ethanol hinzu, um das Gerüst zu rehydrieren, und waschen Sie es mit dem Medium.

Führen Sie ein Medium ein, das ein Protein der extrazellulären Matrix, Laminin, enthält. Inkubieren, damit Laminin das Gerüst beschichten kann.

Säen Sie die menschlichen neuralen Stammzellen in einem neuronalen Medium, das Wachstumsfaktoren enthält, auf das mit Laminin beschichtete Gerüst.

Inkubieren, um die Migration der Stammzellen in das poröse Gerüst zu ermöglichen, wo das Laminin die Zelladhärenz am Gerüst fördert.

Die Zellen nutzen die Wachstumsfaktoren und vermehren sich innerhalb dieses Gerüsts.

Fügen Sie ein wachstumsfaktorfreies neuronales Medium hinzu und ersetzen Sie das verbrauchte Medium regelmäßig, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu erhalten.

Das Fehlen von Wachstumsfaktoren stimuliert die Differenzierung von Stammzellen zu neuralen Vorläuferzellen.

Im Laufe der Zeit verlängern sich die neuronalen Prozesse dieser Vorläuferzellen, was ein multidirektionales Zellwachstum ermöglicht und eine dreidimensionale Kultur bildet.

Rehydr