Generierung und Differenzierung primärer Neurosphären aus neuralen Stammzellen von Zebrafischen

Beginnen Sie mit einer Multiwell-Platte, die ein mit Wachstumsfaktoren angereichertes Wachstumsmedium enthält.

Eine einzellige Suspension von neuralen Stammzellen des Zebrafisches aussäen und inkubieren.

Zunächst verwerten die Stammzellen die Wachstumsfaktoren und vermehren sich.

Entfernen Sie Ablagerungen und fügen Sie das frische Medium hinzu, um die kontinuierliche Zellproliferation und spontane Aggregation zu fördern, um frei schwebende primäre Neurosphären zu bilden.

Übertragen Sie dann die Neurosphären in eine frische Vertiefung, die das Wachstumsmedium enthält.

Inkubieren Sie unter den gleichen Bedingungen, um eine fortschreitende Expansion der Neurosphären zu induzieren.

Pipettieren Sie wiederholt, um die Neurosphären mechanisch in kleine Cluster zu zerlegen.

Übertragen Sie sie anschließend auf eine gut beschichtete extrazelluläre Matrix, um ihre Haftung zu erleichtern.

Ersetzen Sie das Wachstumsmedium durch ein insulinhaltiges, wachstumsfaktorfreies Differenzierungsmedium.

Das Fehlen von Wachstumsfaktoren und das Vorhandensein von Insulin stimulieren die Zelldifferenzierung in Gliazellen und Neuronen mit neuronalen Projektionen.

Um sich auf die Neurosphärenbildung vorzuber