Eine Co-Kulturtechnik zur Differenzierung menschlicher neuronaler Vorläuferzellen in Neuronen
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:14 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Kultur von menschlichen neuralen Vorläuferzellen (NPCs), die auf einer extrazellulären Matrix gestützt sind.
Die NPCs sind so konstruiert, dass sie ein fluoreszierendes Protein exprimieren.
Entsorgen Sie das Medium und waschen Sie die Zellen, um alle Medienreste zu entfernen.
Inkubieren Sie die Kultur mit Enzymen, die die Matrix aufbrechen und die Zellen dissoziieren.
Übertragen Sie die abgelösten Zellen in ein Röhrchen und fügen Sie ein Medium hinzu, um die enzymatische Wirkung zu neutralisieren.
Zentrifugen, um die Zellen zu pelletieren, den Überstand zu verwerfen und die NPCs in einem neuronalen Differenzierungsmedium zu resuspendieren.
Übertragen Sie die NPCs auf eine etablierte Co-Kultur von Maus-Astrozyten und kortikalen Neuronen der Ratte.
Wachstumsfaktoren, die durch die etablierte Co-Kultur freigesetzt werden, fördern zusammen mit den Zell-Zell-Kontakten der NPCs mit den kortikalen Neuronen und Astrozyten die Differenzierung der NPCs in reife Neuronen.
Die reifen Neuronen zeigen ausgedehnte zelluläre Prozesse und bilden synaptische Verbindungen.
Verwenden Sie unter einem konfokalen Mikroskop das Signal der fluoreszierenden Proteine, um die menschlichen NPC-
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos