Isolierung von Mikroglia aus der Hirnrinde eines adulten Mausgehirns

Nehmen Sie eine frisch geerntete Hirnrinde einer Maus.

Schneide das Taschentuch in kleine Fragmente. Sie werden in einen gekühlten Homogenisator überführt, der einen Puffer mit RNase-Inhibitoren und DNasen enthält.

Homogenisieren Sie das Gewebe optimal, um Zellen in Suspension freizusetzen, wobei Mikroglia aufgrund ihrer Fähigkeit, Scherkräften standzuhalten und die Lebensfähigkeit der Membran zu erhalten, selektiv erhalten bleiben, während Neuronen und andere Gliazellen eliminiert werden.

Darüber hinaus bauen RNase-Inhibitoren RNasen ab, während DNasen kontaminierende DNA abbauen.

Führen Sie die Zellsuspension durch ein Zellsieb, um Gewebereste zu entfernen.

Übertragen Sie die Zellsuspension in ein Röhrchen. Zentrifugieren und den Überstand, der Enzyme enthält, entfernen. Suspendieren Sie die Zellen in einem Puffer.

Fügen Sie magnetische Anti-Myelin-Mikrokügelchen hinzu. Diese Mikrokügelchen zielen auf das Myelinprotein ab und binden Myelintrümmer und Oligodendrozyten.

Das Zell-Bead-Gemisch wird in eine Verarmungssäule geladen, die aus einer Matrix mit ferromagnetischen Kugeln besteht.

Unter dem angelegten Magnetfeld werden die mikrokügelchengebundenen Myelintrümmer und Oligodendr