Verwendung eines Makrophagen-konditionierten Mediums zur Förderung von Neuronenerweiterungen

Beginnen Sie mit zyklischem Adenosinmonophosphat oder cAMP, einem Signalmolekül, das verschiedene zelluläre Funktionen reguliert. Fügen Sie cAMP zu einer Neuron-Makrophagen-Co-Kultur hinzu.

Die cAMP-Moleküle aus dem Medium und die Wachstumsfaktoren aus den Neuronen lösen die Aktivierung der Makrophagen aus.

Übertragen Sie den Einsatz mit aktivierten Makrophagen in eine andere Vertiefung, die ein Makrophagen-Kulturmedium enthält.

Hier geben die Makrophagen Zytokine und Chemokine an das Medium ab und bilden ein konditioniertes Medium oder CM.

Zentrifugieren Sie das CM, um die zellulären Bestandteile zu pelletieren.

Übertragen Sie den Überstand und den Filter, um die Zelltrümmer zu entfernen.

Fügen Sie das gesammelte CM zu einer neuronalen Kultur hinzu. Die Zytokine und Chemokine in den gesammelten CM fördern die Neuronenerweiterungen.

Fügen Sie gekühltes Paraformaldehyd hinzu, um die Zellen zu fixieren.

Fügen Sie einen Blockierungspuffer hinzu, um eine unspezifische Bindung von Antikörpern zu vermeiden. Waschen Sie, um den restlichen Puffer zu entfernen.

Wenden Sie primäre Antikörper an, die auf die Zytoskelettproteine der Neuronen abzielen. Waschen, um ungebundene Antikörper zu entf