Verfolgung des axonalen Transports von Organellen in Motoneuronen mit einem mikrofluidischen Gerät

Beginnen Sie mit einer polymerbeschichteten mikrofluidischen Kammer mit proximalen und distalen Vertiefungen, die über mehrere Mikrorillen verbunden sind.

Platzieren Sie in der proximalen Vertiefung embryonales Rückenmarksgewebe der Maus, das reich an sich entwickelnden Motoneuronen ist.

Ergänzen Sie dies gut mit einem Nährmedium. Inkubieren, um das Wachstum der Neuronen und die Haftung an der polymerbeschichteten Oberfläche zu ermöglichen.

Später gibst du ein wachstumsfaktorfreies Nährmedium in die proximale Vertiefung.

In distalen Vertiefungen fügen Sie ein höheres Volumen an Nährmedium hinzu, das Wachstumsfaktoren enthält, um Konzentrations- und Volumenunterschiede zu erzeugen.

Diese Unterschiede führen dazu, dass die Axone, die längeren neuronalen Fortsätze, über die Mikrorillen in Richtung der distalen Vertiefungen wachsen.

Geben Sie eine fluoreszierende Farbstofflösung in beide Vertiefungen.

Die Farbstoffmoleküle dringen in die Neuronen ein und färben die Mitochondrien und sauren Organellen an beiden Enden.

In der konfokalen Live-Bildgebung bewegen sich fluoreszenzgefärbte Organellen in beide Richtungen zwischen den neuralen Zellkörpern und den Axonen, was den axonalen Transp