Erzeugung von primären retinalen Ganglienzellkulturen aus Zebrafischembryonen

Beginnen Sie mit Zebrafischembryonen im frühen Entwicklungsstadium in Embryomedien.

Entfernen Sie das Chorion, die Schutzmembran, die die Embryonen umgibt, und übertragen Sie die Embryonen auf eine frische Kulturplatte mit Medien.

Entfernen Sie den Schwanzteil des Embryos, trennen Sie dann den Kopf und lösen Sie vorsichtig die Augen vom Kopf.

In den Augen befindet sich die Netzhaut, eine dünne Gewebeschicht, in der sich die Ganglienzellen der Netzhaut befinden.

Übertragen Sie die Augen in ein Röhrchen mit Zebrafisch-Zellkulturmedien.

Dissoziieren Sie die Augen mechanisch, um die retinalen Ganglienzellen freizusetzen und eine Einzelzellsuspension zu bilden.

Nehmen Sie Deckgläser, die in eine Kulturplatte mit Zebrafisch-Nährmedien gelegt werden.

Die Deckgläser sind mit einem synthetischen Polymer und einem Adhäsionsprotein beschichtet.

Übertragen Sie die Zellen auf die Mitte des Deckglases und inkubieren Sie.

Retinale Ganglienzellen heften sich an die beschichteten Oberflächen, und darüber hinaus entwickeln diese Zellen lange Vorsprünge, die Axone genannt werden.

Entnehmen Sie Zebrafischembryonen aus dem Inkubator und tauchen Sie die Embryonen für 5 bis 10 Sekunden in eine 35-Millime