Präparation von Hirnschnitten mit einer NMDG-basierten protektiven Wiederherstellungsmethode
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:59 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem isolierten Gehirn. Tauchen Sie das Gehirn schnell in eine vorgekühlte künstliche Zerebrospinalflüssigkeit oder aCSF, um die Stoffwechselprozesse zu unterbrechen.
Das aCSF enthält NMDG, ein großes organisches Kation, das die Schädigung und den Tod von neuronalen Zellen reduziert.
Das aCSF enthält auch HEPES, das den pH-Wert und die Salzkonzentration aufrechterhält und Zellschwellungen und -schäden verhindert.
Übertragen Sie das Gehirn auf eine Petrischale, in der sich ein Filterpapier befindet.
Trimmen Sie das Gehirn, um die gewünschte Region zu erhalten.
Fixieren Sie den Hirnblock mit einem geeigneten Kleber im Probenhalter und betten Sie ihn in die Agarose ein.
Positionieren Sie den Probenhalter in der Aufschnittmaschine.
Füllen Sie den Behälter des Slicers mit dem vorgekühlten aCSF und belüften Sie die Lösung, um eine optimale Sauerstoffversorgung zu gewährleisten.
Besorge dir Abschnitte des Gehirnblocks.
Übertragen Sie die Schnitte in den vorgewärmten Liquor, um die Stoffwechselprozesse wieder in Gang zu bringen und die Schnitte zu erholen.
Das intakte Gehirn vorsichtig in das Becherglas mit vorgekühltem NMDG-HEPES aCSF schöpfen und das Gehirn etwa 1 Minut
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos