Isolierung und Kultivierung adulter neuraler Stammzellen aus der subkallosalen Zone der Maus

Beginnen Sie mit einem Mäusegehirn auf einer gekühlten Gehirnmatrix.

Ermitteln Sie Schnitte, die die subkallosale Zone oder SCZ enthalten. Übertragen Sie den Schnitt in einen kalten Phosphatpuffer.

Schneiden Sie unter einem Präpariermikroskop den SCZ-Teil aus.

Den sezierten SCZ in kleinere Stücke schneiden.

Übertragen Sie diese Stücke in einen Verdauungspuffer. Inkubieren, um die Zellen vom Gewebe zu trennen.

Zentrifugieren und den Überstand verwerfen. Resuspendieren Sie die Zellen in einem geeigneten Medium.

Übertragen Sie die Zellen auf eine Kulturplatte und fügen Sie spezifische Wachstumsfaktoren hinzu.

Die adulten neuralen Stammzellen teilen sich und bilden Cluster, die Neurosphären genannt werden.

Eine unsachgemäße Nährstoffverteilung in Zellclustern schränkt das Zellwachstum ein.

Um die Cluster zu dispergieren, wird der Überstand zentrifugiert und verworfen. Halten Sie die Cluster in einem Dissoziationspuffer erneut an, und inkubieren Sie sie.

Pipettieren Sie die Lösung auf und ab, um einzelne Zellen zu erzeugen.

Zentrifugieren und den Überstand verwerfen.

Resuspendieren Sie die Zellen und überführen Sie sie in ein geeignetes Medium, um eine Monoschicht zu erhalten.

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