JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:44 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Kulturschale, die mit einem Zellkultursubstrat beschichtet ist, um die Zelladhäsion zu erleichtern.
Die Schale enthält einen One-Well-Kultureinsatz ohne einen Boden in der Mitte, wodurch ein definiertes Fach entsteht. Der Umriss dieses Kompartiments ist auf der Schale markiert, um die Zellmigration zu beobachten.
Führen Sie eine Zellsuspension in das Kompartiment ein, das periventrikuläre Endothelzellen oder PVECs, Zellen, die die Blutgefäße im Gehirn auskleiden, und Interneuronen enthält, die während der Gehirnentwicklung entlang der PVECs wandern.
Geben Sie ein Co-Kulturmedium in die Schale, um die Feuchtigkeit zu erhalten, und inkubieren Sie, um das Anhaften der Zellen am Substrat zu erleichtern.
Entfernen Sie den Einsatz, um die physische Barriere zu beseitigen. Frischen Sie das Medium auf und inkubieren Sie erneut.
Die PVECs vermehren sich und erweitern das Endothelzellnetzwerk über die Insert-Grenze hinaus.
Die PVECs sezernieren Faktoren, die als Leitsignale fungieren und die Interneuronen anweisen, entlang des PVEC-Netzwerks zu wandern.
Die Co-Kultur, die eine Interneuronenmigration aufweist, ist bereit für die Analyse.
Um den Co-Kultur-Assay durchzuführen, suspendieren Sie 30.000 GABAerge Interneurone und 30.000 humane periventrikuläre Endothelzellen in 70 Mikrolitern Co-Kulturmedium. Säen Sie dann diese Zelllösung in ein Ein-Well-Einsatzfach. Entfernen Sie nach 48 Stunden die Einlage. Inkubieren Sie die Co-Kultur fünf Tage lang bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid.