Erzeugung reifer Kleinhirn-Organoide aus induzierten pluripotenten Stammzellen mit Hilfe von Einweg-Bioreaktoren

Säen Sie humane induzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) in einem Bioreaktor aus. Die iPSCs werden in Medien resuspendiert, die einen zellulären Apoptose-Inhibitor enthalten.

Unter einem Magnetfeld dreht sich das vertikale Rad des Bioreaktors mit einer kontrollierten Geschwindigkeit, was den Zell-Zell-Kontakt und die Aggregatbildung erleichtert. Entfernen Sie die meisten Medien und fügen Sie frische Medien ohne Inhibitor hinzu.

Kultivieren Sie weiter. Sobald die Aggregate eine optimale Größe erreicht haben, lassen Sie sie durch die Schwerkraft absetzen. Entfernen Sie das Medium.

Fügen Sie Differenzierungsmedien hinzu, die Wachstumsfaktoren enthalten, und kultivieren Sie mit einer reduzierten Drehzahl des Bioreaktorrads. Die Wachstumsfaktoren fördern die neuronale Differenzierung innerhalb der Aggregate.

Fügen Sie anschließend frisches Medium hinzu, das mit Wachstumsfaktoren und Chemokinen ergänzt wird, die die Entwicklung von Kleinhirnvorläuferzellen induzieren.

Nach und nach organisieren sich die Kleinhirnvorläuferzellen in unterschiedlichen Schichten innerhalb der Aggregate und bilden frühe Kleinhirnorganoide.

Fügen Sie schließlich ein neuronales Medium hinzu, das spezifische