JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 6:18 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir ein durchblutetes Mäusegehirn, das einen Tumor enthält.
Durch den Perfusionsschritt werden zirkulierende Immunzellen entfernt, die tumorinfiltrierten Zellen bleiben jedoch erhalten.
Isolieren Sie das Gewebe, das den Tumor enthält.
Dissoziieren Sie nun das Gewebe mechanisch.
Durch die mechanische Kraft wird das Gewebe gelockert und die Zellen werden freigesetzt.
Übertragen Sie das dissoziierte Gewebe in ein Röhrchen.
Zentrifugieren Sie und entsorgen Sie den Überstand, der Rückstände enthält.
Resuspendieren Sie das Gewebe in einer Verdauungslösung, die Kollagenase und DNase enthält.
Kollagenase baut die extrazelluläre Matrix ab und setzt die Zellen frei. DNase baut kontaminierende DNA ab.
Fügen Sie einen Puffer hinzu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen.
Filtern Sie die Suspension, um Zellaggregate zu entfernen und eine einzellige Suspension zu erhalten.
Zentrifugieren und den Überstand verwerfen.
Resuspendieren Sie Zellen in einem Gradientenmedium mit hoher Dichte. Überlagern Sie nun mit einem Gradientenmedium mit geringerer Dichte, wodurch ein Separationsgradient mit einer klaren Schnittstelle entsteht.
Zentrifugieren Sie, um die Schichten zu trennen. Immunzellen sa
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