JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:16 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die mit einer extrazellulären Matrix (ECM) beschichtet ist.
Führen Sie nicht-transgene und transgene humane pluripotente Stammzellen (hPSCs) in getrennte Vertiefungen in ein Kulturmedium ein.
Transgene hPS-Zellen tragen ein Transgen unter einem Antibiotika-induzierbaren Promotor. Das Transgen kodiert für einen Transkriptionsfaktor, der die neuronale Differenzierung induziert.
Inkubieren, um die Zelladhäsion an die EZM zu erleichtern. Kleine Moleküle im Medium verhindern die Apoptose und fördern die Zellproliferation.
Fügen Sie eine Ablösung, um die Zellen zu dissoziieren, fügen Sie das Medium hinzu, um die Dissoziation zu stoppen, und übertragen Sie sie dann auf eine andere EZM-beschichtete Mikroplatte, um die Zellproliferation zu ermöglichen.
Ein neuronales Differenzierungsmedium mit kleinen Molekülen wird auf die nicht-transgenen Zellen und das Induktor-Antibiotikum auf die transgenen Zellen eingebracht.
Die kleinen Moleküle veranlassen nicht-transgene Zellen, sich zu neuralen Vorläuferzellen oder NPCs zu differenzieren. In den transgenen Zellen werden durch die Antibiotika-induzierte Expression des Transkriptionsfaktors die Gene aktiviert, die f
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