Replattierung differenzierter Neuronen aus humanen pluripotenten Stammzellen

Beginnen Sie mit einer großen Kulturplatte, die aus humanen pluripotenten Stammzellen gewonnene differenzierte Neuronen mit einem dichten neuronalen Netzwerk enthält.

Inkubieren Sie diese Neuronen mit milden proteolytischen Enzymen, um sie von der Platte zu lösen und sie als Blatt anzuheben.

Bei fortgesetzter Inkubation stören Enzyme die Zellverbindungen teilweise und lockern die neuronalen Netzwerke.

Fügen Sie ein Nährmedium hinzu, um die Enzymaktivität zu stoppen.

Pipettieren Sie die abgelösten Neuronen wiederholt, um sie voneinander zu trennen.

Filtern Sie die Neuronen durch ein Zellsieb, um Zellklumpen zu entfernen und die einzelnen Neuronen zu sammeln.

Zentrifugieren und den Überstand entfernen. Suspendieren Sie sie in einem Wachstumsmedium.

Für die Neubeschichtung säen Sie diese Neuronen auf ein Polymer und eine mit Adhäsionsproteinen beschichtete Multi-Well-Platte. Inkubieren, um ihre Anheftung zu ermöglichen.

Neuronen nutzen Nährstoffe aus dem Medium, um lebensfähig zu bleiben. Tauschen Sie das Nährmedium regelmäßig aus, um den Nährstoffgehalt aufrechtzuerhalten.

Inkubieren Sie weiter, um die neuronale Reifung und die Bildung von Verbindungen zwischen ihnen zu ermöglichen.