Generierung kortikaler Interneuronen-Vorläufer aus embryonalen Stammzellen der Maus
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:03 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir embryonale Stammzellen der Maus, die in serumfreien Medien suspendiert sind, die niedermolekulare Inhibitoren enthalten.
Säen Sie die Zellen auf einer nicht adhärenten Kulturplatte, damit sie sich vermehren und zu dreidimensionalen Embryoidkörpern oder EBs aggregieren können.
Darüber hinaus blockieren die Inhibitoren nicht-neuronale Signalwege und induzieren die Differenzierung embryonaler Stammzellen in Richtung eines kortikalen neuronalen Schicksals.
Übertragen Sie die EBs in ein Röhrchen, zentrifugieren Sie und entfernen Sie den Überstand.
Resuspendieren Sie die EBs in einer Lösung, die einen Enzymcocktail und DNase enthält.
Die Enzyme dissoziieren die EBs in einzelne Zellen, während DNase kontaminierende DNA abbaut.
Fügen Sie serumfreie Medien hinzu, die Inhibitoren enthalten, um die enzymatische Aktivität zu stoppen, zentrifugieren Sie dann und entfernen Sie den Überstand, der Enzyme enthält.
Resuspendieren Sie die Zellen in Medien, die niedermolekulare Inhibitoren enthalten, und überführen Sie sie auf Kulturplatten, die mit Adhäsionsfaktoren beschichtet sind.
Die Zellen heften sich an die beschichtete Plattenoberfläche.
Die Inhibitoren verhindern den apoptotischen
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos