Generierung neuronaler Vorläuferzellen aus embryonalen Stammzellen der Maus mit der Hanging Drop-Methode

Nehmen Sie eine embryonale Stammzellsuspension der Maus.

Zentrifuge, entfernen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in einem neuronalen Differenzierungsmedium.

Tröpfchen der Suspension auf die Innenseite eines Kulturplattendeckels geben.

Fügen Sie der Bodenplatte einen Puffer hinzu, um ein Austrocknen der Tröpfchen zu verhindern. Legen Sie den Deckel auf die Bodenplatte, so dass eine hängende Tropfenkultur entsteht, und inkubieren Sie.

Aufgrund der Schwerkraft gruppieren sich die Zellen und bilden dreidimensionale Aggregate, die als Embryoidkörper oder EBs bezeichnet werden.

Die Tröpfchen werden in eine Platte mit dem Differenzierungsmedium gegeben und unter Rühren für das Wachstum der EBs inkubiert.

Das Medium wird zentrifugiert und entfernt; die EBs werden in dem mit Retinsäure versetzten Differenzierungsmedium resuspendiert, auf eine Kulturplatte überführt und inkubiert.

Retinsäure dringt in die Zellen ein und löst die Bildung eines Transkriptionskomplexes aus. Der Komplex induziert die Genexpression und löst die Differenzierung in neurale Vorläuferzellen aus.

Die differenzierten EBs sind bereit für nachgelagerte Anwendungen.

Beginnen Sie mit dem Einrichten der hä