Isolierung induzierter neuraler Vorläuferzellkolonien, die aus adulten humanen Fibroblasten stammen

Beginnen Sie mit einer adhärenten Kultur von induzierten neuralen Vorläuferzellkolonien, die von adulten menschlichen Fibroblasten in einer lamininbeschichteten Multi-Well-Platte stammen.

Waschen Sie die Kolonien mit einem Puffer, um nicht anhaftende Zellen zu entfernen, und fügen Sie dann frischen Puffer hinzu.

Kratzen Sie um einzelne Kolonien herum, um umliegende Zellen zu entfernen.

Die Kolonien werden in frische, mit Laminin beschichtete Vertiefungen mit Neuroinduktionsmedium überführt.

Die Kolonien werden mechanisch zerlegt, um eine einzellige Suspension zu erhalten.

Laminin, ein extrazelluläres Matrixprotein, interagiert mit den Oberflächenproteinen der Vorläuferzellen und erleichtert so die Zelladhäsion an der Well-Oberfläche.

Fügen Sie einen niedermolekularen Inhibitor hinzu, der in die Zellen eindringt und spezifische Proteinkinasen blockiert, wodurch die zelluläre Apoptose verhindert wird.

Wachstumsfaktoren und kleine Moleküle, die im Neuroinduktionsmedium vorhanden sind, erleichtern die Proliferation der Vorläuferzellen.

Ersetzen Sie das Medium regelmäßig, um die Nährstoffe wieder aufzufüllen und die fortgesetzte Proliferation der Vorläufer zu erleichtern.

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