JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:15 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer mit Gelatine beschichteten Multiwell-Platte, die aus embryonalen Stammzellen der Maus gewonnene neurale Vorläuferzellen in einem nährstoffreichen basalen Differenzierungsmedium enthält.
Die Vorläuferzellen nutzen diese Nährstoffe aus dem Medium, um ihre Lebensfähigkeit zu erhalten.
Inkubieren, um die Zellanhaftung an der gelatinebeschichteten Oberfläche zu ermöglichen, dann waschen, um nicht gebundene Zellen und Ablagerungen zu entfernen.
Führen Sie ein basales Differenzierungsmedium ein, das mit einem Stabilisator, zusätzlichen Nährstoffen und neuronalen Wachstumsfaktoren ergänzt wird, die für die Zelldifferenzierung entscheidend sind, und inkubieren Sie dann.
Die Vorläuferzellen verbrauchen die Nährstoffe und Wachstumsfaktoren und initiieren ihre Differenzierung zu Neuronen, die beginnen, ihre zellulären Prozesse zu verlängern.
Gleichzeitig interagiert das Stabilisierungsmittel mit toxischen Metaboliten und schützt die sich entwickelnden Neuronen vor oxidativen Schäden, wodurch ihre Lebensfähigkeit erhalten bleibt.
Tauschen Sie das Medium regelmäßig aus, um den Nährstoffgehalt aufrechtzuerhalten.
Im Laufe der Zeit reifen die Neuronen und entwickeln Axone – die längeren zellulären Prozesse.
Darüber hinaus entwickeln sie auch Dendriten, die kürzeren zellulären Prozesse, die die Differenzierung von Stammzellen in Neuronen bestätigen.
Säen Sie etwa 500.000 embryonale Stammzellderivate der Maus in 2 Millilitern basalem Differenzierungsmedium pro Vertiefung auf die mit 0,1 % Gelatine beschichteten Platten. Teilen Sie die Derivate nach dem Zufallsprinzip in drei Gruppen ein, um drei Phase-II-Differenzierungsprotokolle zu testen. Inkubieren Sie die Platte sechs Stunden lang. Waschen Sie dann die Zellen zweimal mit 2 Millilitern PBS und geben Sie je nach Protokoll 2 Milliliter basales Differenzierungsmedium, N2 B27 Medium 1 oder N2 B27 Medium 2 in jede Vertiefung. Legen Sie die Platten in den Inkubator und lassen Sie die Zellen weitere 10 Tage lang differenzieren, wobei Sie alle zwei Tage das entsprechende Medium wechseln.