Generierung von Neuronen durch Reprogrammierung menschlicher dermaler Fibroblastenzellen
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:32 Min. • July 8th, 2025
Führen Sie adulte humane dermale Fibroblasten oder aHDFs, die in einem Fibroblastenmedium suspendiert sind, in eine mit extrazellulären Matrixproteinen beschichtete Mikroplatte ein. Inkubieren, um die Zelladhärenz zu ermöglichen.
Einführung eines transgenen lentiviralen Vektors. Bei der Internalisierung in die Wirtszelle wird die virale RNA in DNA reverse-transkribiert, die sich in das Wirtsgenom integriert.
Die virale DNA exprimiert Transkriptionsfaktoren und kurze Haarnadel-RNAs oder shRNAs. Zelluläre Nukleasen verarbeiten die shRNAs zu kleinen interferierenden RNAs oder siRNAs.
Die erzeugten siRNAs bauen die mRNA ab, die für transkriptionelle Repressoren kodiert, wodurch deren Expression gehemmt und die Aktivierung von neuronalen Differenzierungsgenen ermöglicht wird.
Die Transkriptionsfaktoren aktivieren die Gene und fördern so die neuronale Differenzierung der aHDFs.
Entfernen Sie das Medium, das die nicht internalisierten Vektoren enthält.
Fügen Sie ein frühes neuronales Umwandlungsmedium hinzu, das Wachstumsfaktoren und kleine Moleküle enthält, die die Differenzierung in neuronenähnliche Zellen induzieren.
Ersetzen Sie das Medium durch ein spätes neuronales Umwandlungsmedium
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