JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:12 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit dem Gehirn eines Mäusewelpen.
Isolieren Sie das Kleinhirn und erhalten Sie Gewebescheiben mit angemessener Dicke.
Übertragen Sie die Scheiben auf Membraneinsätze, die sich in Kulturplattenvertiefungen mit Medien befinden.
In behandelten Vertiefungen enthält das Medium eine neuroprotektive Testverbindung. In Kontrollbohrungen fehlt die Verbindung. Ausbrüten.
Unter Kontrollbedingungen durchlaufen die kleinhirnären Purkinje-Zellen eine Apoptose, die die frühe postnatale Entwicklung in vivo nachahmt.
In behandelten Vertiefungen kann die Verbindung je nach ihrem Potenzial die Zellen vor Apoptose schützen.
Waschen Sie die Scheiben und fixieren Sie sie, um die Zellintegrität zu erhalten.
Übertragen Sie die Scheiben in eine Permeabilisierungs-Blockierungslösung, um die Zellmembranen zu permeabilisieren und unspezifische Bindungsstellen zu blockieren.
Overlay mit primären Antikörpern, die auf ein Kalziumbindungsprotein abzielen, das spezifisch in Purkinje-Zellen exprimiert wird.
Waschen und einführen Sie fluorophorkonjugierte Sekundärantikörper, die auf die Primärantikörper abzielen.
Färben Sie die Zellkerne mit einem DNA-bindenden Farbstoff gegengefärbt und montieren Sie d
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