Dissoziation und Kultivierung von Neuronen aus Gewebeproben des Hippocampus

Beginnen Sie mit Gewebeproben des Hippocampus, die Neuronen und verschiedene nicht-neuronale Zellen enthalten.

Fügen Sie eine Protease-Enzymlösung hinzu. Das Enzym baut die extrazelluläre Matrix des Gewebes ab und leitet so die Zelldissoziation ein.

Mit einem Beschichtungsmedium waschen, um Enzymreste zu entfernen.

Pipettieren Sie das verdaute Gewebe wiederholt, um die Zellen mechanisch vom Gewebe zu trennen und eine Einzelzellsuspension zu bilden.

Zentrifugieren und den Überstand entfernen. Resuspendieren Sie die Zellen im Beschichtungsmedium.

Säen Sie die Zellen auf ein mit Poly-D-Lysin beschichtetes Deckglas in einer Multi-Well-Platte. Lysin verbessert die Zelladhäsion.

Ersetzen Sie das Beschichtungsmedium durch ein Neuronenerhaltungsmedium, das essentielle Nährstoffe für das Überleben der Neuronen enthält.

Frischen Sie die Hälfte des Mediums mit Erhaltungsmedien auf, die Arabinosylcytosin oder Ara-C enthalten.

Ara-C dringt in die Zellen ein und hemmt selektiv das Wachstum nicht-neuronaler Zellen, was zu deren Tod führt.

Ersetzen Sie das Medium durch frische Erhaltungsmedien, um das Überleben der Neuronen zu unterstützen.

Um die Hippocampus-Neuronen für die Kultur zu dissoziiere