JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:08 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit humanen induzierten pluripotenten Stammzellkolonien, die auf einer adhärenten Basalmembranmatrix kultiviert werden.
Fügen Sie ein Kleinhirn-Differenzierungsmedium hinzu, das ein spezifisches Hormon, einen Wachstumsfaktor und niedermolekulare Inhibitoren enthält.
Heben Sie die Kolonien mit einer Glaspipette an und übertragen Sie sie auf eine extrem niedrige Befestigungsplatte.
Die Oberfläche mit geringer Bindung hält die Zellen in Suspension und erleichtert ihre Aggregation zu dreidimensionalen Embryoidkörpern (EBs).
Das Hormon, der Wachstumsfaktor und die Inhibitoren binden an ihre jeweiligen Zielstellen und fördern so die Differenzierung der Stammzellen in neuronale Vorläuferzellen.
Übertragen Sie die EBs in Kulturplatten-Wells, die mit einem synthetischen Polymer und einem Adhäsionsprotein beschichtet sind, um die EB-Bindung zu erleichtern.
Ersetzen Sie das Medium durch ein inhibitorfreies Differenzierungsmedium.
Die Zellen beginnen, von den EBs nach außen zu wandern und eine 2D-Monoschicht zu bilden.
Entfernen Sie das Medium und fügen Sie ein Kleinhirnreifungsmedium hinzu.
Wachstumsfaktoren im Medium induzieren die Reifung neuronaler Vorläuferzellen zu unterschi
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