JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:48 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit Hirnstammgewebefragmenten, die ein diffuses intrinsisches Ponsgliom enthalten, einen Tumor, der von glialen Vorläuferzellen in einer myelinisierten nervenreichen Umgebung abstammt.
Mit proteolytischen Enzymen behandeln, um die extrazelluläre Matrix des Gewebes abzubauen.
Pipettieren Sie den Inhalt nach der Inkubation wiederholt, um die Zelldissoziation und den Abbau der Myelinscheide zu erleichtern.
Filtrieren und zentrifugieren, um die Zellen zu sammeln. Entfernen Sie den Überstand und suspendieren Sie ihn in einem kalten Puffer
.Fügen Sie eine Saccharoselösung für die Trennung des Dichtegradienten hinzu und mischen Sie gründlich.
Als nächstes zentrifugieren Sie, um die schwereren Zellen von den leichteren Myelinresten zu trennen.
Entfernen Sie die Myelinschicht und fügen Sie einen Erythrozyten-Lysepuffer hinzu.
Fügen Sie einen kalten Puffer hinzu, um die Lyse zu stoppen. Zentrifugen Sie und entfernen Sie den Überstand, um die lysierten Erythrozyten zu entfernen.
Resuspendieren Sie die Zellen in einem warmen neurobasalen Medium und kultivieren Sie sie in einem unbeschichteten Kolben.
Das Fehlen neurotroper Faktoren führt zum neuronalen Tod, während die glialen Vor
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