Erzeugung von Sphäroiden aus humanen pluripotenten Stammzellen

Beginnen Sie mit Kolonien von humanen pluripotenten Stammzellen oder hPSCs, die an ein geeignetes Substrat in einem Kulturmedium gebunden sind.

Entfernen Sie das Medium. Fügen Sie ein neuronales Medium hinzu, das spezifische Inhibitoren enthält, und inkubieren Sie.

Diese Inhibitoren lenken die Reifung von hPSCs in Richtung einer neuronalen Linie und bilden neuroektodermale Kolonien. Dabei handelt es sich um Vorläufer kleiner, kugelförmiger Strukturen, die als Sphäroide bezeichnet werden.

Entfernen Sie das Medium und waschen Sie es mit einem Salzpuffer.

Mit einem Verdauungsenzym inkubieren, um die Kolonien von der Platte zu lösen.

Fügen Sie das neuronale Medium hinzu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen.

Sammle die Kolonien und übertrage sie in eine Röhre.

Lassen Sie sie sich absetzen und entsorgen Sie dann den Überstand.

Resuspendieren Sie die Kolonien in einem neuronalen Medium, das einen Wachstumsfaktor enthält.

Übertragen Sie die Kolonien auf eine Multi-Well-Platte und inkubieren Sie.

Dieser Wachstumsfaktor erleichtert die Selbstorganisation und Vermehrung von neuroektodermalen Zellen und führt dazu, dass sie ein Sphäroid bilden.

Zu Beginn plattieren Sie die hPSC-Kolonien a