Isolierung von Stammzellen aus dem postnatalen Kleinhirn der Maus und Differenzierung in Nervenzellen

Nehmen Sie Zellen, die aus dem Kleinhirn einer neugeborenen Maus isoliert wurden und Stammzellen, Neuronen und Gliazellen enthalten.

Fügen Sie Antikörper-beschichtete magnetische Mikrokügelchen hinzu, die an ein stammzellspezifisches Oberflächenglykoprotein binden.

Zentrifugen, entfernen Sie die ungebundenen Kügelchen und resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer

.

Laden Sie die Zellen auf eine Trennsäule, die sich in einem Magnetseparator befindet, der die an Mikrokügelchen gebundenen Stammzellen zurückhält, während andere Zellen hindurchfließen.

Fügen Sie ein Neurosphärenmedium hinzu, um die Zellen zu eluieren und in eine Mikroplatte zu übertragen. Inkubieren, um die Bildung von primären Neurosphären, sich selbst erneuernden Kolonien von Stammzellen, zu induzieren.

Zentrifugieren und das Medium verwerfen. Resuspendieren Sie die Neurosphären in einem Medium, das Enzyme enthält, um die zellulären Adhäsionsproteine zu verdauen.

Zentrifugieren und die Enzyme entfernen. Fügen Sie das Neurosphärenmedium hinzu und dissoziieren Sie die Zellen mechanisch.

Inkubieren, um die Proliferation von Stammzellen und die Bildung sekundärer Neurosphären zu ermöglichen, während sich die differenzi