JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:24 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir die Netzhaut einer Ratte, eine lichtempfindliche Schicht des Auges, die retinale Ganglienneuronen oder RGNs enthält.
Legen Sie die Netzhaut in eine kaltbalancierte Salzlösung, um Gewebeschäden zu vermeiden.
Übertragen Sie die Netzhaut in eine Lösung, die Protease und DNase enthält, und schneiden Sie sie in kleinere Stücke.
Den Inhalt in ein Röhrchen umfüllen und inkubieren.
Die Protease baut die extrazelluläre Matrix auf und lockert die Zellen, während die DNase die kontaminierende DNA abbaut.
Pipettieren Sie auf und ab, um Zellklumpen zu verteilen.
Fügen Sie eine Inhibitorlösung hinzu, um die Proteasewirkung zu stoppen.
Zentrifugieren Sie die Zellen, um sie abzusetzen. Entfernen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in einem geeigneten Wachstumsmedium.
Geben Sie diese Zellsuspension in die Monoschicht der olfaktorischen Glia- oder OEG-Zellen, einer Art von Gliazellen, und inkubieren Sie.
Die RGNs integrieren sich in die OEG-Monoschicht und etablieren so das Co-Kultur-Modell zur Bewertung des neuroregenerativen Potenzials von OEGs.
Legen Sie die Netzhaut in eine zuvor vorbereitete P-60-Zellkulturschale mit 5 Millilitern kaltem EBSS. Dann wird es in eine P-6
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