Retinsäure-induzierte Neurogenese anhand embryonaler Karzinomzellen der Maus

Nehmen Sie eine embryonale Karzinom-Zellsuspension der Maus, die in der Lage ist, sich in verschiedene Zelltypen zu differenzieren.

Samenzellen auf einer hydrophoben Kulturschale, die Medien und Retinsäure enthält.

ausbrüten. Hydrophobe Oberflächen verhindern die Zelladhäsion, wodurch die Zellen Aggregate bilden.

Retinsäure dringt in Zellaggregate ein, löst Signalwege aus und bewirkt die Differenzierung in neuronale Vorläuferzellen.

Sammeln Sie nach der Inkubation die Zellaggregate.

Entsorgen Sie die Medien.

Geben Sie medien, die Retinsäure enthalten, und säen Sie die Aggregate auf eine hydrophobe Kulturschale.

ausbrüten. Retinsäure ermöglicht eine nachhaltige zelluläre Differenzierung in Neuronen.

Sammeln Sie die Aggregate, und entfernen Sie die Datenträger.

Fügen Sie ein proteolytisches Enzym hinzu, um die Zell-Zell-Adhäsionen innerhalb der Aggregate zu stören.

Fügen Sie serumhaltige Medien hinzu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen.

Dissoziieren Sie die Aggregate mechanisch und bilden eine neuronale Suspension.

Zentrifugieren und den enzymreichen Überstand verwerfen.

Resuspendieren Sie die Neuronen in Medien und säen Sie sie auf eine adhärente Multi-Well-Platte, die Medien