Differenzierung embryoider Körperzellen in neurale Vorläuferzellen mit Hilfe von Retinsäure

Beginnen Sie mit embryonalen Stammzellen, die über einer Schicht von Fibroblasten-Feederzellen kultiviert werden, die die Stammzellen in ihrem undifferenzierten Zustand halten.

Fügen Sie Trypsin-Enzyme und EDTA hinzu, um die Zell-zu-Zell-Adhäsion zu stören und die Zellen abzulösen.

Später fügen Sie ein mit Serum angereichertes Kulturmedium hinzu, um die Enzymaktivität zu stoppen, und überführen Sie die Zellsuspension in ein Röhrchen.

Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu sammeln, entfernen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen dann in einem Medium, das Retinsäure enthält.

Tröpfchen dieser Zellsuspension auf den Boden einer nicht klebenden Kulturschale geben.

Drehen Sie den Boden um, um hängende Tropfen zu bilden, und positionieren Sie ihn über dem Deckel der Kulturschale, der mit einem Puffer gefüllt ist, um ein Austrocknen der Tröpfchen zu verhindern.

In hängenden Tropfen bewirkt die Schwerkraft, dass sich die Zellen am Boden absetzen und sich schließlich zu dreidimensionalen Strukturen zusammenballen, die als Embryoidkörper bezeichnet werden.

Darüber hinaus absorbieren die Zellen Retinsäure, die verschiedene intrazelluläre Signalwege moduliert.

Diese Modulation stimu