Ein in vitro Transduktions-induzierter Myelinisierungsassay für Oligodendrozyten-Vorläuferzellen
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:27 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie adhärente Kulturen von primären Oligodendrozyten-Vorläuferzellen (OPCs) in einem Wachstumsmedium ein.
Geben Sie lentivirale Kontrollvektoren in die Kontrollvertiefung und Testvektoren, die Signalproteine kodieren, die die Myelinisierung regulieren, in die Testvertiefung und inkubieren Sie dann.
Die Zellen internalisieren die Vektoren, und die virale RNA wird in DNA umgekehrt transkribiert und in das Wirtsgenom eingebaut, wobei die Signalproteine in den Testzellen exprimiert werden.
Führen Sie Enzyme ein, um die OPCs vom Substrat zu lösen.
Neutralisieren Sie die Enzyme und zentrifugieren Sie, um die Enzyme zu entfernen.
Fügen Sie das Wachstumsmedium hinzu und übertragen Sie die OPCs auf Deckgläser in einer Mikroplatte mit verklebten Spinalganglion oder DRG-Neuronen. Lassen Sie die OPCs absetzen.
Füllen Sie die Vertiefungen mit dem Wachstumsmedium und inkubieren Sie. Die Interaktion mit den DRG-Neuronen löst die OPC-Reifung zu Oligodendrozyten aus.
Die exprimierten Signalproteine veranlassen Oligodendrozyten, Myelinscheiden um die DRG-Neuronen zu bilden.
Beurteilen Sie die durch Signalproteine induzierte Myelinscheidenbildung in den Testzellen im Vergleich zu den Kontrollv
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