Isolierung und Kultivierung von Oligodendrozyten-Vorläuferzellen aus dem Gehirnkortex von Maus-Welpen

Nehmen Sie den Kortex eines Mauswelpen.

Fügen Sie ein proteolytisches Enzym hinzu, das die extrazelluläre Matrix des Gewebes verdaut. Dissoziieren Sie dann das Gewebe mechanisch und lockern die Zellen.

Fügen Sie Gliamedien und DNase hinzu, um kontaminierende DNA abzubauen.

Dissoziieren Sie das Gewebe mechanisch, um Neuronen und Gliazellen freizusetzen.

Sobald sich das unverdaute Gewebe abgesetzt hat, sammeln Sie das Medium mit den Zellen und zentrifugieren Sie. Entfernen Sie den Überstand.

Resuspendieren Sie die Zellen in Gliamedien und plattieren Sie sie auf einem mit extrazellulären Matrixproteinen beschichteten Kolben.

ausbrüten. Astrozyten haften stärker an der beschichteten Oberfläche als andere Zellen. Gliamedien fördern nur das Überleben der Gliazellen.

Tauschen Sie das Medium aus, um Schmutz zu entfernen.

Inkubieren Sie durch Schütteln, um die darüber liegenden Oligodendrozyten-Vorläuferzellen, OPCs und Mikroglia abzulösen.

Übertragen Sie das Medium mit den Zellen auf eine Kulturplatte.

Inkubieren Sie durch Schütteln, um die differentielle Adhäsion der Mikroglia zu erleichtern.

Übertragen Sie den nicht adhärenten OPC-Überstand auf eine Poly-D-Lysin-beschichtete Multiwell-Pl