Eine Technik zur Erzeugung von Gehirn-Organoiden aus menschlichen embryonalen Stammzellen

Man nehme Kolonien von humanen embryonalen Stammzellen (hESCs), die auf einer Stützmatrix kultiviert werden.

Aspirieren Sie das Medium und fügen Sie Enzyme hinzu, die die Matrix abbauen.

Waschen, um die Enzyme zu entfernen. Fügen Sie dann ein Medium und eine Pipette hinzu, um die gelösten Kolonien zu lösen und sie in kleinere Cluster zu zerlegen.

Übertragen Sie die Cluster in ein frisches Medium und inkubieren Sie, so dass die Cluster kugelförmige Aggregate bilden können.

Lassen Sie die Kugeln sich absetzen und entfernen Sie alle abgestorbenen Zellen.

Inkubieren Sie mit einem Medium, das den basischen Fibroblasten-Wachstumsfaktor (bFGF) für die Zellproliferation enthält.

Füllen Sie mit Medien auf, die allmählich abnehmende bFGF-Konzentrationen enthalten, um die Zelldifferenzierung zu erleichtern.

Einführung eines neuronalen Induktionsmediums, das die hES-Differenzierung in neuronale Stammzellen oder NSCs fördert und die Kugeln in Organoide mit einer neuronalen Rosetten-ähnlichen Struktur verwandelt.

Fügen Sie Antibiotika hinzu, um das Wachstum kontaminierender Mikroben während längerer Kulturen zu verhindern.

Die NSCs differenzieren sich in Neuronen und Gliazellen und entwickeln di