Isolierung und Kultur von okulomotorischen, trochleären und spinalen Motoneuronen aus einem Mausembryo

Nehmen Sie eine transgene schwangere Maus und entfernen Sie chirurgisch die Gebärmutter mit Embryonen, die fluoreszenzmarkierte Motoneuronen enthalten.

Übertragen Sie die Gebärmutter in eine Schale mit einem eiskalten Puffer unter einem Fluoreszenzmikroskop

.

Verwenden Sie sichtbares Licht, um die Embryonen zu isolieren.

Entfernen Sie das Gesicht und den Schwanz der Embryonen und richten Sie sie in Bauchlage aus.

Machen Sie mit Hilfe des Fluoreszenzsignals einen Schnitt im Mittelhirn, um die okulomotorischen und trochleären Kerne freizulegen, die Motoneuronen enthalten.

Isolieren Sie das Mittelhirn, das die Zellkerne enthält.

Öffnen Sie die dorsale Seite des Hinterhirns und des Rückenmarks. Isolieren Sie das Rückenmark, entfernen Sie beide Enden und sammeln Sie die Säulen mit den spinalen Motoneuronen.

Behandeln Sie das gesammelte Gewebe mit Enzymen, um die Gewebematrix zu dissoziieren. Ernten Sie die einzelnen Zellen und isolieren Sie fluoreszenzmarkierte Neuronen mit FACS.

Geben Sie ein Kulturmedium zu den isolierten Neuronen, übertragen Sie die Zellen auf eine mit Kultursubstrat beschichtete Mikroplatte und inkubieren Sie, damit die Zellen anhaften und wachsen können.

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