Umgang mit neuronalen Stammzellkulturen in einer Zellproduktionsanlage

Um die Kontamination in neuronalen Stammzellkulturen zu minimieren, verwenden Sie eine Anlage mit einer laminaren Haube, einer Pufferkammer, einer Prozesskammer und einer Mikroskopkammer, die jeweils durch luftdichte Türen getrennt sind.

Füllen Sie nun Wasser in eine Kulturplatte im Inkubator, um die Luftfeuchtigkeit aufrechtzuerhalten.

Stellen Sie die Pufferkammer, die Prozesskammer und die Inkubatorparameter auf optimale Werte ein.

Reinigen Sie alle Oberflächen mit einem Desinfektionsmittel und steriler Gaze, um mikrobielle Verunreinigungen zu beseitigen.

Platzieren Sie die neuronale Stammzellkulturplatte zuerst in der laminaren Haube, die gefilterte Luft liefert.

Wischen Sie die Außenseite der Platte mit ethanolgetränkter Gaze ab und geben Sie sie dann in die Pufferkammer, die die gefilterte Luft mit optimalen Gasgehalten versorgt.

Schieben Sie abschließend die Platte durch die Prozesskammer in den Inkubator und schließen Sie die Tür.

Bringen Sie die Kulturplatte nach der Inkubation zusammen mit etwas frischem Medium zurück in die Prozesskammer.

Gleichen Sie das frische Medium aus.

Frischen Sie das Medium in die Kulturplatte und inkubieren Sie die Platte erneut.

Stellen Sie drei Petrischalen in die Wasserschale am Boden jedes Inkubators. Füllen Sie diese Schalen mit sterilem Wasser und halten Sie den Wasserstand in diesen Schalen aufrecht, da sie für die Aufrechterhaltung des Sollwerts der relativen Luftfeuchtigkeit im Inkubator entscheidend sind.

Klicken Sie in der grafischen Oberfläche auf Inkubator. Klicken Sie anschließend auf den vorhandenen Wert für die relative Luftfeuchtigkeit unter dem Sollwert und geben Sie 85% ein. Klicken Sie dann auf das grüne Häkchen, um diesen Wert zu übernehmen.

Stellen Sie als Nächstes die Pufferkammern, die Prozesskammer und einen Inkubator auf die Gassollwerte ein, die für den einzuführenden Zelltyp erforderlich sind. Reinigen Sie die Oberfläche der Prozesskammer mit steriler Gaze und einem nicht brennbaren Desinfektionsmittel, wie z. B. Produkten auf Benzalkoniumchlorid-Basis.

Reinigen Sie dann die Handschuhe und Oberflächen, die häufig berührt werden, wie z. B. Türgriffe. Reinigen Sie anschließend die Oberfläche der Laminar-Flow-Haube und der Pufferkammer mit 70% Ethanol und lassen Sie sie trocknen.

Legen Sie danach den Kolben oder die Platte mit den Zellen in die Haube und wischen Sie die Außenseite kurz mit einem sterilen, mit Ethanol getränkten Mullschwamm ab. Legen Sie dann den Kolben oder die Platte in die Pufferkammer und führen Sie einen Verdünnungsfaktor durch. Übertragen Sie den Kolben oder die Platte sofort nach Fertigstellung in den entsprechenden Inkubator.

Da sich der Inkubator im hinteren Teil der Prozesskammer befindet, ziehen Sie ein Regal in die Prozesskammer heraus, um die Zellen zu platzieren, und vermeiden Sie es, die Inkubatortüren unnötig oder über längere Zeiträume zu öffnen.

Bereiten Sie in diesem Schritt das Zellkulturmedium vor. Lassen Sie das Medium mit dem im System vorhandenen Kohlendioxid- und Sauerstoffgehalt ausgleichen, indem Sie den Medienbehälter 20 Minuten lang leicht unverschlossen lassen.

Entfernen Sie anschließend das alte Medium aus den Vertiefungen. Bei pluripotenten Stammzellen entfernen Sie fast das gesamte alte Medium, wobei eine kleine Menge des alten Mediums übrig bleibt, um ein Austrocknen während des Fütterungsprozesses zu verhindern. Bei neuralen Stammzellen entfernen Sie die Hälfte des alten Mediums. Geben Sie dann frisches Medium in die Zellkulturplatten und legen Sie die Platten wieder in den dafür vorgesehenen Inkubator.