JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 6:24 Min. • July 8th, 2025
Beginnen wir mit nicht-adhärenten Neurosphären, einem dreidimensionalen Aggregat menschlicher neuraler Stammzellen in einem aus Zellkulturen gewonnenen konditionierten Medium.
Dieses Medium enthält Nährstoffe, Wachstumsfaktoren und extrazelluläre Matrixkomponenten, die die Lebensfähigkeit der Zellen aufrechterhalten.
Zentrifuge, um die Neurosphären zu sammeln.
Behandeln Sie sie mit Trypsin- und DNase-Enzymen, mischen Sie den Inhalt und inkubieren Sie sie.
Trypsin stört die Zell-zu-Zell-Adhäsion und erleichtert die Zellablösung, während DNase freie DNA abbaut, um Zellverklumpungen zu verhindern.
Pipettieren Sie den Inhalt wiederholt, um eine einzellige Suspension zu bilden. Fügen Sie dann einen Trypsin-Inhibitor hinzu, um die Enzymaktivität zu neutralisieren.
Zentrifugieren und entfernen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen dann in einem Proliferationsmedium, das neuronale Wachstumsfaktoren enthält.
Die Zellsuspension auf ein polymerbeschichtetes Deckglas säen, das in einer Multiwell-Platte platziert ist. Inkubieren, um die Anheftung der Stammzellen an das Polymer zu ermöglichen.
Darüber hinaus differenzieren sich die Stammzellen auf der Grundlage der Absorption spezi
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