JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 6:26 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Vertiefungsplatte mit geringer Bindung, die humaninduzierte pluripotente Stammzellen oder iPSCs in einem Stammzellmedium enthält, das mit einem Rho-Kinase-Inhibitor ergänzt wird.
Die Inhibitoren dringen in die Zellen ein, blockieren die Rho-Kinase-Enzyme und halten die Lebensfähigkeit der Zellen aufrecht. Dies fördert die Bildung von iPS-Aggregaten.
Ersetzen Sie das Medium durch ein Stammzellmedium, damit die Aggregate wachsen können. Übertragen Sie sie in eine Kulturschale mit geringer Anhaftung und einem kortikalen Induktionsmedium.
Die Bestandteile dieses Mediums bewirken, dass sich die iPSCs in neuroektodermale Zellen, eine neuronale Vorstufe, differenzieren.
Übertragen Sie jedes neuroektodermale Aggregat auf eine Folie mit flachen Vertiefungen.
Ersetzen Sie das Medium durch eine Basalmembranmatrix und inkubieren Sie, um die Matrixverfestigung und den Einschluss von Aggregaten zu ermöglichen.
Diese in die Matrix eingebetteten Aggregate werden in eine Schale mit einem kortikalen Induktionsmedium überführt und unter Rühren inkubiert.
Im Laufe der Zeit nutzen die neuroektodermalen Zellen die Differenzierungsfaktoren und entwickeln sich zu Neuroepithelzellen.
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