Bildung und Expansion von Neurosphären aus einem Hippocampusgewebe

Beginnen Sie mit einem postnatalen Gyrus des Hippocampus dentatus der Maus, einem Gehirngewebe, das reich an neuralen Stamm- und Vorläuferzellen mit Selbsterneuerungsfähigkeit ist.

Fügen Sie Trypsin-Enzyme hinzu, die die extrazelluläre Matrix des Gewebes dissoziieren und die Zellen lockern.

Entfernen Sie anschließend die Enzyme und waschen Sie das Gewebe wiederholt mit einem Puffer.

Ersetzen Sie den Puffer durch ein mit Wachstumsfaktoren angereichertes Neuronenkulturmedium.

Wiederholtes Pipettieren Sie, um das Gewebe zu dissoziieren und die Zellen in das Medium freizusetzen.

Die verdünnte Zellsuspension in einer unbeschichteten Petrischale aussäen und inkubieren.

Stamm- und Vorläuferzellen nutzen Nährstoffe und Wachstumsfaktoren, um sich zu vermehren.

Im Laufe der Zeit aggregieren sie spontan und bilden frei schwebende dreidimensionale Strukturen, die als primäre Neurosphären mit einer heterogenen Zellpopulation bezeichnet werden.

Sammeln Sie diese Neurosphären und entsorgen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Neurosphären in einem Neuronenkulturmedium und dissoziieren Sie in eine Einzelzellsuspension.

Rekulturieren Sie diese Zellen in einer unbeschichteten Petrischale, um se