Generierung von Endothelzellen des Gehirns aus induzierten pluripotenten Stammzellen
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:35 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine induzierte pluripotente Stammzellkultur (iPSC) in Erhaltungsmedien, die Rho-Kinase-Inhibitoren enthalten.
Wachstumsfaktoren halten die Zellen undifferenziert, während Rho-Kinase-Inhibitoren das Überleben der Zellen verbessern.
Ersetzen Sie das Medium durch frische Erhaltungsmedien und entfernen Sie die Rho-Kinase-Inhibitoren. Inkubieren, Förderung der Koloniebildung.
Regelmäßig durch unkonditionierte Medien ersetzen, die eine kontrollierte Umgebung bieten und die iPSC-Differenzierung in neuronale Vorläuferzellen und dann Gehirnendothelzellen auslösen, gefolgt von der Zellproliferation.
Ersetzen Sie es durch Endothelzellmedien, die Retinsäure und Fibroblasten-Wachstumsfaktoren enthalten. Ausbrüten.
Fibroblasten-Wachstumsfaktoren erleichtern die Zellproliferation, während Retinsäure die Reifung der Endothelzellen des Gehirns fördert.
Fügen Sie proteolytische Enzyme hinzu, um die Zellen abzulösen. Sammeln Sie die Zellen und zentrifugieren Sie. Entsorgen Sie den Überstand.
Resuspendieren Sie die Zellen in endothelialen Medien und säen Sie sie auf einen Multiwell-Membraneinsatz, der mit Kollagen und Fibronektin beschichtet ist.
Die Vertiefung enthält endotheliale Medien.
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