Eine Methode zur Isolierung neurovaskulärer Einheiten aus dem Gehirn von Ratten

Beginnen Sie mit einem kalten Glasmörser, der kortikales Hirngewebe von Ratten enthält, das die äußerste Schicht des Gehirns ist.

Fügen Sie einen Gehirn-Mikrogefäßpuffer oder BMB hinzu, der Proteaseinhibitoren enthält.

Bewegen Sie nun den Stößel auf und ab, um das Gewebe zu dissoziieren.

Diese Bewegung setzt die neurovaskulären Einheiten (NVUs) frei, die aus Mikrogefäßen, Perizyten, Neuronen und Gliazellen bestehen. Die Proteasehemmer blockieren die freigesetzten Proteasen und schützen so die Mikrogefäße.

Gib diese Mischung in ein Röhrchen.

Fügen Sie eine dichte Polysaccharidlösung hinzu. Verwenden Sie einen Wirbel, um die Lösung gleichmäßig mit dem anderen Inhalt zu vermischen.

Zentrifuge. Die dichten Polysaccharide ermöglichen die Sedimentation von NVUs, die dichter sind als Gewebetrümmer.

Der Überstand ist zu verwerfen und die NVUs in BMB, das den Proteaseinhibitor und die Polysaccharidlösung enthält, zu resuspendieren.

Verwenden Sie den Vortex, um den Inhalt zu mischen.

Wiederholen Sie den Zentrifugationsvorgang. Entsorgen Sie den Überstand, um alle Rückstände zu entfernen.

Unterbrechen Sie die NVUs in BMB erneut, und speichern Sie sie für die weitere Analyse.

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