Präparation von kollikulo-thalamokortikalen Schnitten aus dem Gehirn eines Mäusewelpen

Legen Sie das Gehirn eines Mäusewelpen mit der Rückenseite nach oben auf eine Rutsche.

Schneiden Sie die Vorderseite des Gehirns ab und positionieren Sie sie auf der entstandenen ebenen Fläche neu.

Richten Sie die dorsale Fläche und die Mittellinie des Gehirns auf dem Objektträger aus. Schräg schneiden, um die verbundenen auditorischen Mittelhirn- und Vorderhirnstrukturen auszurichten. Bei diesen Strukturen handelt es sich um den Colliculus inferior oder IC, den medialen Genikulatkörper oder MGB, den nucleus reticularus thalamus oder TRN und den auditorischen Kortex oder AC.

Befestigen Sie die eckig geschnittene Gehirnoberfläche mit Agarblöcken auf einem Vibratom-Probentisch und stellen Sie sicher, dass das Hinterhirn auf dem dünneren Block abgestützt ist.

Übertragen Sie den Tisch in das Vibratom und fügen Sie einen Puffer hinzu, um Gewebeschäden zu vermeiden.

Beginnen Sie mit dem Schneiden, um IC, MGB, TRN und AC zu lokalisieren.

Entnehmen Sie die Scheibe mit den verbundenen Regionen, die als kollikulo-thalamokortikale Scheibe bezeichnet wird, und überführen Sie die Scheibe in eine Haltekammer, um die Lebensfähigkeit des Gewebes zu erhalten.

Um die Schneidstufe für das Schneiden vorzubereiten, schneiden Sie ein kleines Stück 3%iger Agar von etwa 1 Kubikzentimeter ab, das als Rückhalt für das Gehirn verwendet wird, und ein weiteres Stück von 1,5 Zentimeter x 1,5 Millimeter x 3 Millimeter, um es als Beule zur Unterstützung des Colliculus inferior zu verwenden.

Als nächstes kleben Sie die Rücklaufsperre mit Cyanacrylatkleber auf die Bühne und kleben dann die Beule auf der rechten Seite der Rücklaufsperre so, dass sie einen 80-Grad-Winkel bilden. Platzieren Sie auf einer Folie, die mit zwei Linien in einem Winkel von 90 Grad und einer diagonalen Linie in einem Winkel von 17 Grad von links oben nach rechts unten gekennzeichnet ist, die Rückenseite des Gehirns nach oben am Schnittpunkt der beiden Linien.

Entferne mit einer Rasierklinge 2 bis 4 Millimeter des rostralen Endes des Gehirns, um eine ebene Oberfläche zu schaffen. Legen Sie als Nächstes die kaudale Seite des Gehirns nach oben auf die neu geschaffene flache Fläche. Richten Sie die dorsale Oberfläche des Gehirns an einer horizontalen Linie und die Mittellinie des Gehirns an einer vertikalen Linie aus, die auf der Folie markiert ist. Richte dann die Rasierklinge mit einer 17-Grad-Linie aus. Neigen Sie den Rasierer in einem Winkel von 30 Grad und entfernen Sie etwa 3 Millimeter des rechten Kortex in einem doppelten diagonalen Schnitt

Um das Gehirn auf der Vibratomenbühne zu montieren, legen Sie ein kleines Stück Filterpapier auf die ventrale Seite des Gehirns, so dass die lange Dimension senkrecht zur Mittellinie steht. Tragen Sie vorsichtig eine kleine Menge Cyanacrylatkleber auf den Bereich vor dem Backstop und links von der Beule auf. Legen Sie anschließend die doppelt diagonal geschnittene Gehirnseite so auf den Kleber, dass der kaudale Teil des Gehirns und das Hinterhirn auf der Beule abgestützt sind und die rechte Seite des Gehirns gegen den Rückhalt liegt.

Platzieren Sie bei diesem Verfahren den Schneidtisch schnell im Vibratom. Füllen Sie die Bühne mit Schneidlösung. Richten Sie als Nächstes die Klinge an der Oberseite des Gehirns aus. Entfernen Sie 1 bis 1,5 Millimeter von der Oberseite des Gehirns. Schneiden und entfernen Sie dann weitere Scheiben von 300 bis 500 Mikrometern, während Sie tiefer gehen.

Wenn der Colliculus inferior, der mediale Genikulatkörper und der Nucleus geniculatus lateralis sichtbar sind, sollte der Gyrus dentatus als C-Form erscheinen und die Struktur in einer Ausrichtung sein. Etwa zwei Scheiben von 600 Mikrometern erhalten. Dies sind die kollikulothalamokortikalen Schnitte. Bringen Sie sie danach in die 32 Grad Celsius heiße Warmhaltekammer.