JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:34 Min. • July 8th, 2025
Nimm einen Abschnitt der Wirbelsäule einer Ratte und teile ihn, um das Rückenmark zu entfernen.
Trennen Sie die Spinalganglien oder DRGs, eine Ansammlung von Neuronen, die von Satelliten-Gliazellen (SGCs) umgeben sind.
Lege die DRGs in ein Wachstumsmedium. Entfernen Sie die Nervenwurzeln, um die SGC-Kontamination zu reduzieren.
Mit Kollagenase behandeln, um die Gewebematrix abzubauen, und waschen, um die Enzyme zu entfernen.
Führen Sie Trypsin ein, um interzelluläre Verbindungen zu stören. Fügen Sie ein Serum hinzu, das Proteine enthält, die Trypsin deaktivieren.
Fügen Sie das Wachstumsmedium hinzu und dissoziieren Sie das Gewebe mechanisch. Filtern Sie die Suspension, um einzelne Zellen zu isolieren, und zentrifugieren Sie, um Gewebeablagerungen zu entfernen.
Resuspendieren Sie die Zellen, um sie auf einem Dichtegradientenmedium zu schichten, und zentrifugieren Sie.
Neuronen mit einer höheren Dichte siedeln sich am Boden an, was die Trennung von SGCs erleichtert.
Resuspendieren Sie die Neuronen in einem Kulturmedium. Übertragen Sie sie in eine mit Kultursubstrat beschichtete Vertiefung, um die Zelladhäsion zu ermöglichen.
Ergänzung mit Nervenwachstumsfaktoren für das neuronale Übe
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