Isolierung und Kultivierung von zerebralen Perizyten der Maus

Fügen Sie dem Gehirngewebe der Maus Puffer hinzu und homogenisieren Sie es, um Zellen und Mikrogefäße freizusetzen.

Geben Sie anschließend die BSA-Dextran-Lösung zum Homogenat. Mischen und zentrifugieren, um die Komponenten zu trennen. Entsorgen Sie den Überstand.

Suspendieren Sie die Mikrogefäße wieder in Puffer und leiten Sie sie durch einen Filter, wobei Sie größere Gefäße entfernen.

Zentrifugieren Sie nun das Filtrat und entfernen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Mikrogefäße in Puffer, der DNAsen enthält.

Fügen Sie proteolytische Enzyme hinzu, um Endothelzellen und Perizyten freizusetzen.

DNasen bauen DNA ab.

Fügen Sie BSA-haltigen Puffer hinzu, um die Enzymaktivität zu stoppen. Zentrifugieren und den Überstand verwerfen.

Resuspendieren Sie die Zellen in Medien und plattieren Sie sie auf einer mit Basalmatrix beschichteten Multiwell-Platte. Inkubieren und fördern die Zelladhäsion.

Wechseln Sie regelmäßig das Medium.

Endothelzellen bilden eine Monoschicht und unterstützen das Wachstum der Perizyten.

Die anschließende Zellpassage in Perozytenmedien auf einer gelatinebeschichteten Multiwell-Platte fördert das Perinozytenwachstum und eliminiert gleichzeitig Endothelzellen.