Gewinnung einer einzelligen Suspension aus Hippocampusgewebe der Maus

Entnehmen Sie perfundierte adulte Maus-Hippocampi-Fragmente in einem Dissoziationsröhrchen, das Papain und DNase enthält.

Legen Sie das Rohr auf einen mechanischen Dissoziator.

Der Dissoziator zersetzt mechanisch das Gewebe und lockert Zellen, einschließlich Neuronen und Gliazellen.

Papain bricht die extrazelluläre Matrix des Gewebes ab und setzt Zellen frei. DNase baut kontaminierende DNA ab.

Fügen Sie BSA-haltigen Puffer hinzu, der die Enzyme inaktiviert.

Führen Sie die Suspension durch ein Sieb, um große Rückstände zu entfernen.

Das Filtrat zentrifugieren. Entsorgen Sie den enzymreichen Überstand.

Resuspendieren Sie die Zellen in Puffer und überführen Sie sie in ein frisches Röhrchen.

Fügen Sie Dichtegradientenmedien hinzu, mischen Sie sie und überlagern Sie die Mischung mit Puffer.

Während der Zentrifugation bilden Zellen und Trümmer je nach Dichte getrennte Schichten.

Entfernen Sie die oberste Pufferschicht und die mittlere Schmutzschicht.

Fügen Sie der unteren Schicht, die die Zellen enthält, Puffer hinzu und mischen Sie. Der Überstand mit dem Dichtegradientenmedium wird zentrifugiert und verworfen.

Suspendieren Sie die Hippocampuszellen für die weitere Analyse in Puffer

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Übe