Herstellung einer einzelligen Suspension von Immunzellen aus murinem Hirngewebe

Beginnen Sie mit einem murinen Gehirn mit neuralen, nicht-neuralen und Immunzellen in der extrazellulären Matrix oder EZM des Gehirns.

Zerkleinern Sie das Gewebe und resuspendieren Sie es in einem Nährmedium.

Übertragen Sie diese Gewebefragmente in ein Röhrchen und behandeln Sie sie mit Kollagenase und DNase-I-Enzymen.

Kollagenase verdaut die EZM und setzt einzelne Zellen frei, während DNase-I freie DNA abbaut, um Zellverklumpungen zu verhindern.

Fügen Sie dann EDTA hinzu, um die Kollagenase-Enzyme zu inaktivieren.

Fügen Sie einen Nährboden hinzu. Zentrifugieren und den Überstand entfernen.

Geben Sie eine Dichtegradientenlösung und das Kulturmedium zum Zellpellet, wodurch eine Gradientenschicht mit geringer Dichte entsteht.

Mischen Sie die Lösung und unterlegen Sie sie dann mit einer Gradientenlösung mit hoher Dichte, um einen Dichteunterschied herzustellen.

Zentrifugieren Sie bei niedriger Geschwindigkeit, um Immunzellen an der Grenzfläche zu trennen, mit leichteren Zelltrümmern oben und schwereren neuronalen und Gliazellen unten.

Entfernen Sie die obere Schicht, sammeln Sie die Immunzellen und übertragen Sie sie in ein anderes Röhrchen.

Zentrifugieren und entfernen Sie den Überst