Isolierung von primären Oligodendrozyten der Maus mit immunmagnetischen Beads

0 Ansichten3:06 Min. • July 8th, 2025

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Nehmen Sie eine Nervenzellsuspension, einschließlich unreifer Oligodendrozyten und primärer neuronaler Zellen, von einem Mausjungen.

Suspendieren Sie die Zellen in einem magnetischen Zellsortierpuffer, um ein Verklumpen der Zellen zu vermeiden.

Fügen Sie technisch hergestellte magnetische Mikrokügelchen hinzu, die Anti-O4-Antikörper auf ihrer Oberfläche tragen. Rühren Sie die Lösung um, um eine gleichmäßige Durchmischung zu gewährleisten.

Inkubieren, damit Mikrokügelchen an sulfatiertes Galaktolipid, ein O4-Antigen auf Oligodendrozyten, binden können, während andere Zellen ungebunden oder lose gebunden bleiben.

Waschen Sie die Mischung mit zusätzlichem Zellsortierpuffer.

Zentrifugieren und verwerfen Sie den Überstand, dann resuspendieren Sie die Zellen.

Geben Sie dann die an Kügelchen gebundenen Zellen in eine magnetische Trennsäule, die mit einem Filter ausgestattet ist, der die größeren Zellklumpen entfernt.

Während des Laufs bewegen sich die perlengebundenen Komplexe unter einem Magnetfeld auf den Magneten zu und heften sich an den Seiten.

Waschen, um ungebundene und lose gebundene Zellen zu entfernen.

Nehmen Sie die Säule aus dem Separator und waschen Sie sie mit einem Proliferationsmedium, um die primären Oligodendrozyten für zukünftige Anwendungen zu sammeln.

Nach der Zählung zentrifugieren Sie die Zellen erneut und resuspendieren das Pellet in 90 Mikrolitern frischem magnetischem Zellsortierpuffer pro 1 x 107 Zellen. Fügen Sie dann 10 Mikroliter Anti-O4-Kügelchen pro 1 x 107 Zellen hinzu und mischen Sie die Zelllösung mit leichtem Schnippen. Nach 15 Minuten bei 4 Grad Celsius wird durch leichtes Schnippen alle 5 Minuten vorsichtig 2 Milliliter magnetischer Zellsortierpuffer pro 1 x 107 Zellen für eine Zentrifugation hinzugefügt und der Überstand durch vorsichtige Vakuumaspiration verworfen.

Das Pellet wird in 500 Mikrolitern frischem magnetischem Zellsortierpuffer pro 1 x 10 7 Zellen resuspendiert und eine Magnetbead-Sortiersäule geeigneter Größe in den entsprechenden Magnetseparator eingesetzt. Legen Sie ein 40-Mikron-Sieb auf die Säule und spülen Sie das Sieb mit 3 Millilitern magnetischem Zellsortierpuffer vor, wobei Sie den Puffer durch die Säule laufen lassen, ohne die Säule trocknen zu lassen. Geben Sie die Zellen in das Sieb, gefolgt von einer 1-Milliliter-Wäsche mit magnetischem Zellsortierpuffer.

Waschen Sie die Säule dreimal mit 3 Millilitern magnetischem Zellsortierpuffer pro Waschgang und einmal mit Oligodendrozytenproliferationsmedium. Übertragen Sie dann die Säule in ein 15-Milliliter-Röhrchen und spülen Sie mit dem Kolben sofort 5 Milliliter frisches Oligodendrozytenproliferationsmedium durch die Säule.

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Zuletzt aktualisiert: 15 August 2026