Isolierung von Schwann-Zellen aus spinalen Wurzeln der Maus

Nehmen Sie eine Nervenwurzel und hacken Sie sie in kleine Stücke.

In ein Verdauungsenzym-haltiges Röhrchen umfüllen und inkubieren.

Das Enzym verdaut die extrazelluläre Matrix.

Fügen Sie Medien mit Serum hinzu, um die Verdauung zu stoppen.

Pipettieren Sie den Inhalt wiederholt, zentrifugieren Sie dann und entsorgen Sie den Überstand.

Suspendieren Sie das Pellet erneut.

Führen Sie die Suspension durch ein Sieb, um unverdautes Gewebe zu entfernen. Inkubieren Sie die gesammelten Zellen in einer Platte.

Fibroblasten- und Schwann-Zellen oder SCs heften sich an die Platte und teilen sich.

Entfernen Sie die nicht angehängten Zellen. Waschen Sie die anhaftenden Zellen mit einem Phosphatpuffer.

Fügen Sie Verdauungsenzyme hinzu, um die verdauungsempfindlichen SCs zu lockern. Stoppen Sie die Verdauung mit Medien.

Trennen Sie SCs vollständig, indem Sie Medien hinzufügen.

Übertragen Sie die Zellen in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie. Entsorgen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in SC-spezifischen Medien.

Übertragen Sie die Zellen auf eine unbeschichtete Platte und inkubieren Sie.

Alle verbleibenden Fibroblasten haften an und lassen die SCs in Suspension.

Übertragen Sie die S