Markierung von Oberflächenmarkern neuraler Zellen mit Azidozucker während der Co-Kultivierung mit Endothelzellen

Beginnen Sie mit der Zugabe einer Endothelzellsuspension des Mausgehirns zum permeablen Membraneinsatz einer Transwell-Platte.

Geben Sie ein Wachstumsmedium gut auf den Boden und inkubieren Sie.

Die Wachstumsfaktoren und Nährstoffe im Medium helfen den Zellen, als Monoschicht zu wachsen.

Entfernen Sie das Medium aus der unteren Mulde und aus der Einlage.

Waschen Sie die Innen- und Außenflächen des Einsatzes, um Schmutz zu entfernen.

Geben Sie ein adhärentes Medium in den Einsatz und übertragen Sie den Einsatz in eine matrixbeschichtete Vertiefung, die primäre kortikale neurale Stamm- und Vorläuferzellen (NSPCs) enthält, und inkubieren Sie.

Fügen Sie sowohl den Endothelzellen als auch den NSPCs Azidozucker, ein unnatürliches Sialinsäure-Vorläuferanalogon, hinzu und inkubieren Sie.

Die von Endothelzellen sezernierten Zytokine und Chemokine fördern das Wachstum von NSPCs zu großen blattartigen Klonen.

Azidozucker integrieren sich in die Sialglykanstrukturen auf der NSPC-Zelloberfläche und markieren das Glykoprotein. Dies ermöglicht die Identifizierung von Zelloberflächenproteinen auf den expandierten NSPCs.

Um die Endothelzellen vorzubereiten, resuspendieren Sie ein BEND3-Zellpellet a