JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:19 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Suspension von Zellen und Trümmern aus enzymatisch verdauten Ischiasnervenfasern der Maus.
Durch ein Sieb passieren und Schmutz entfernen.
Das Filtrat zentrifugieren und den Überstand entfernen.
Resuspendieren Sie die Zellen in serumhaltigen Medien und säen Sie sie auf eine mit Adhäsionsproteinen beschichtete Kulturplatte.
Inkubieren für die Zelladhäsion. Ersetzen Sie das Medium durch Schwann-Zellmedien. Inkubieren für die Bildung von Schwann-Zell-Monolagen.
Entfernen Sie das Medium und waschen Sie es mit Puffer. Inkubieren Sie mit Trypsin, um Zellen abzulösen.
Fügen Sie serumhaltige Medien hinzu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen.
Sammeln Sie die Zellen und zentrifugieren Sie. Entsorgen Sie den Überstand.
Resuspendieren Sie die Zellen in Puffer und fügen Sie antikörperbeschichtete magnetische Mikrokügelchen hinzu.
Inkubieren, um Antikörper an Fibroblasten-Glykoproteine zu binden.
Zentrifugieren und den Überstand verwerfen. Suspendieren Sie die Zellen wieder in einem Puffer und laden Sie sie in eine magnetische Trennsäule mit ferromagnetischen Kugeln, die im Magnetfeld des Magnetabscheiders platziert sind.
Das Magnetfeld hält die Mikrokügelchen-gebundenen Fib
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