JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 2:32 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie ein Mäusegehirn, das in einen eiskalten Puffer getaucht ist.
Entfernen Sie das Kleinhirn und trimmen Sie den vorderen Abschnitt, der den medialen präfrontalen Kortex oder mPFC enthält.
Befestigen Sie das Gewebe an einem abgewinkelten Agarblock, der auf einen Vibratomen-Probentisch geklebt wird.
Bringen Sie zusätzliche Agarblöcke an, um die Stabilität beim Schneiden zu gewährleisten. Platzieren Sie den Tisch in der mit sauerstoffhaltigem Eiskaltpuffer gefüllten Vibratom-Schneidkammer.
Erzeugen Sie gekippte Schnitte, die die Amygdala enthalten, die auf Angstreize und neuronale Projektionen des mPFC reagieren, die synaptische Verbindungen in der Amygdala bilden und ihre Aktivität regulieren.
Die gekippten Schichten legen die Projektionen frei und ermöglichen so die Untersuchung der funktionellen Konnektivität zwischen dem mPFC und der Amygdala.
Schneiden Sie die Scheiben in zwei Hälften und legen Sie sie in eine Kammer mit sauerstoffhaltiger künstlicher Zerebrospinalflüssigkeit bei Raumtemperatur, um das Gewebe zu stabilisieren.
Inkubieren Sie die Scheiben bei physiologischer Temperatur, um das Gewebe für nachgelagerte Assays zurückzugewinnen.
Schneide mit einem Skalpell das Kleinhirn ab. Isolieren Sie dann den vorderen Teil des Gehirns, der den medialen präfrontalen Kortex enthält. Füllen Sie die Schneidkammer mit eiskalter Schneidlösung, die mit einem Kühlaggregat auf 4 Grad Celsius gehalten wird. Die Lösung mit Sauerstoff anreichern.
Tupfen Sie das Gehirn mit Filterpapier trocken. Kleben Sie den 4%igen Agarblock, der in einem 35-Grad-Winkel geschnitten wurde, auf die Vibrationsstufe und kleben Sie den hinteren Teil des Hirngewebes auf diesen Block. Kleben Sie zwei zusätzliche Agarblöcke vor und hinter den Gehirnblock, um die Stabilität beim Schneiden zu gewährleisten.
Platzieren Sie den Tisch mit dem angebrachten Gewebe in der Schneidkammer und stellen Sie sicher, dass er untergetaucht ist. Beginnen Sie mit dem Schneiden der spitzen Scheiben. Schneiden Sie jede Scheibe in zwei Hälften und geben Sie sie bei Raumtemperatur in eine Grenzflächenkammer, die mit sauerstoffreichem ACSF versorgt wird. Nach dem Schneiden der akuten Amygdala-Scheiben legen Sie die Grenzflächenkammer in ein Wasserbad bei 36 Grad Celsius und lassen Sie die Scheiben 35 bis 45 Minuten lang erholen.