JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:43 Min. • July 8th, 2025
Gyrus dentatus aus einem Mäusegehirn in einem kalten Homogenisierungspuffer entnehmen.
Dissoziieren mechanisch, um Neuronen, Gliazellen und Stammzellen freizusetzen.
Das milde Detergens des Puffers permeabilisiert die Zellen und setzt Zellkerne und andere Organellen frei.
Filtern Sie das Homogenat, um Gewebereste zu entfernen. Zentrifugieren Sie dann, entfernen Sie die Organellen und resuspendieren Sie sie im Homogenisierungspuffer, um alle intakten Zellen zu lysieren.
Zentrifugieren Sie erneut, entfernen Sie den Überstand mit den freigesetzten Organellen und resuspendieren Sie die Zellkerne in einem Waschpuffer.
Filtrieren Sie, um Schmutz zu entfernen, zentrifugieren Sie und entfernen Sie den Überstand.
Führen Sie eine fluoreszierende DNA-Färbung ein, um alle Zellkerne zu markieren, und einen Fluorophor-konjugierten Antikörper, der an das neuronale Kernantigen (NeuN) bindet und die Neuronenkerne markiert
.Identifizieren Sie mithilfe der fluoreszenzaktivierten Kernsortierung Aggregate mit höherer Fluoreszenzintensität der DNA-Färbung und höheren Streueigenschaften, indem Sie die einzelnen Kerne trennen.
Analysieren Sie die einzelnen Kerne, trennen Sie die NeuN-positiven Neuronalker
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